病原微生物檢測(cè),病原微生物指朊毒體、寄生蟲(chóng)(原蟲(chóng)、蠕蟲(chóng)、醫(yī)學(xué)昆蟲(chóng))、真菌、細(xì)菌、螺旋體、支原體、立克次體、衣原體、病毒。
病原微生物檢測(cè)的血清學(xué)與免疫學(xué)檢測(cè):
血清學(xué)檢測(cè)是通過(guò)已知的抗體或抗原來(lái)檢測(cè)病原體的抗原或抗體從而對(duì)病原體進(jìn)行快速鑒定的技術(shù),簡(jiǎn)化了鑒定步驟,常用的方法包括血清凝集技術(shù)、乳膠凝集實(shí)驗(yàn)、熒光抗體檢測(cè)技術(shù)、協(xié)同凝集試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫測(cè)試技術(shù)等。酶聯(lián)免疫技術(shù)的應(yīng)用大大提高了血清學(xué)檢測(cè)的敏感性和特異性,不僅可檢測(cè)樣本中病原體抗原,也可檢測(cè)機(jī)體的抗體成分。幽門(mén)螺菌在我國(guó)人群感染率高達(dá)50%~80%,應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)唾液中抗HP抗體來(lái)診斷HP感染,其結(jié)果滿(mǎn)意。乙型肝炎病毒(HBV)在我國(guó)人群中感染率*,ELISA應(yīng)用于乙型肝炎病人早期血清學(xué)診斷的效果最為明顯。
臨床上致病菌往往和非致病菌混合在一起,如何從這些細(xì)菌中分離出目標(biāo)菌是關(guān)鍵。免疫磁珠分離技術(shù)(IMBS)是
近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的在微生物檢測(cè)領(lǐng)域中一種新技術(shù)。其基本原理是將特定病原體的單抗或多抗或二抗偶聯(lián)到磁珠微球上,通過(guò)抗原抗體反應(yīng)形成磁珠一目標(biāo)病原體復(fù)合物或磁珠一一抗一目標(biāo)病原體復(fù)合物,在外部磁場(chǎng)磁力的作用下,將目標(biāo)病原體分離出來(lái)。目前已經(jīng)開(kāi)發(fā)出了針對(duì)各種病原體的免疫磁珠,如大腸埃希菌、李斯特菌、白色念珠菌、軍團(tuán)菌等,廣泛應(yīng)用到各級(jí)科研和實(shí)驗(yàn)室。經(jīng)IMBS分離出的白色念珠菌可直接在顯微鏡下檢測(cè),檢測(cè)時(shí)間縮短至4h。IM—Bs還可以和其它檢測(cè)技術(shù)聯(lián)合來(lái)檢測(cè)病原菌,免疫磁珠分離得到的目標(biāo)菌可繼續(xù)用于分離培養(yǎng)使大腸埃希菌0157低檢測(cè)限由200cfu·g提高到2cfu·g~;IMBS結(jié)合聚合酶鏈反應(yīng)(IMBS—PCR)可對(duì)培養(yǎng)條件比較特殊的細(xì)菌如苛養(yǎng)菌、厭氧菌進(jìn)行快速檢測(cè),肉類(lèi)中的產(chǎn)毒素型產(chǎn)氣莢膜梭菌經(jīng)IMBS.PCR檢測(cè),檢測(cè)時(shí)間縮短到10h,低檢測(cè)限可達(dá)10cfu·g~,有研究者利用IMBS結(jié)合實(shí)時(shí)熒光定量PCR(IMBS—RT—PCR)成功檢測(cè)出了水中的輪狀病毒和草莓的諾如病毒,檢測(cè)時(shí)間大大縮短;Leon—Velarde等利用IMB8結(jié)合酶聯(lián)檢測(cè),大大提高了沙門(mén)菌的檢測(cè)效率。