病毒滅活試驗(yàn)是用細(xì)胞感染法測定消毒因子作用前后（或?qū)φ战M與實(shí)驗(yàn)組）樣本中病毒的量。以細(xì)胞病變作為判斷指標(biāo)，確定各組病毒的感染滴度，觀察消毒因子對病毒的滅活效果。那么這個(gè)試驗(yàn)步驟是怎樣的？
 

　　

　　1、懸液法病毒滅活試驗(yàn)

　　

　?。?）取待測消毒劑，用滅菌硬水稀釋至所需濃度的1.25倍，于20℃±1℃水浴中備用。

　　

　?。?）病毒懸液的制備：取出-80℃低溫保存的病毒，室溫解凍后，與有機(jī)干擾物按照1:1比例混合作為消毒劑滅活試驗(yàn)用病毒懸液。

　　

　?。?）消毒試驗(yàn)：取上述病毒懸液1份加入4份待檢消毒劑，立即混勻并記時(shí)。作用至規(guī)定時(shí)間，立即取出0.1mL，加入經(jīng)鑒定合格的0.9mL中和劑中混勻；或用經(jīng)鑒定合格的除藥方法處理。

　　

　?。?）對照組試驗(yàn)：陽性對照組為病毒對照組，觀察病毒生長是否良好，病毒滴度是否達(dá)到試驗(yàn)要求；陰性對照組用細(xì)胞維持液作為陰性對照，觀察有無污染，細(xì)胞生長是否良好。

　　

　　（5）以上各組按照終點(diǎn)稀釋法分別進(jìn)行病毒滴度測定。試驗(yàn)重復(fù)3次。

　　

　?。?）終點(diǎn)稀釋法：用細(xì)胞維持液對待滴定樣本做10倍系列稀釋，吸取樣液100μL，接種于單層細(xì)胞培養(yǎng)板上，每個(gè)滴度接種4孔。在36℃±1℃放置1h～2h后，取出培養(yǎng)板，更換細(xì)胞維持液。繼續(xù)放入二氧化碳培養(yǎng)箱中（36℃±1℃,5%±1%二氧化碳）培養(yǎng)3-4天，顯微鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，記錄細(xì)胞病變情況。

　　

　　2、載體法病毒滅活試驗(yàn)

　　

　?。?）取待測消毒劑，置于20℃±1℃水浴中備用。

　　

　?。?）病毒載體的制備：取滅菌載體片，滴染病毒晾干備用。

　　

　　（3）消毒試驗(yàn)：取病毒載體置于消毒因子，作用至規(guī)定的時(shí)間后取出放入經(jīng)鑒定合格的中和劑或洗脫液1.0mL中，作用10min,混勻洗脫。消毒器械載體布點(diǎn)應(yīng)置于殺滅部位，具體方法參照《消毒技術(shù)規(guī)范》。

　　

　?。?）對照組試驗(yàn)：陽性對照組為病毒對照組，觀察病毒生長是否良好，病毒滴度是否達(dá)到試驗(yàn)要求；陰性對照組用細(xì)胞維持液作為陰性對照，觀察有無污染，細(xì)胞生長是否良好。

　　

　?。?）以上各組按照終點(diǎn)稀釋法分別進(jìn)行病毒滴度測定。試驗(yàn)重復(fù)3次。

　　

　　（6）終點(diǎn)稀釋法：用細(xì)胞維持液對待滴定樣本做10倍系列稀釋，吸取樣液100μL，接種于單層細(xì)胞培養(yǎng)板上，每個(gè)滴度接種4孔。在36℃±1℃放置1h～2h后，取出培養(yǎng)板，更換細(xì)胞維持液。繼續(xù)二氧化碳培養(yǎng)箱中（36℃±1℃,5%±1%二氧化碳）培養(yǎng)3-4天，顯微鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，記錄細(xì)胞病變情況。