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病毒滅活試驗(yàn)病毒懸液該如何制備?

更新時(shí)間:2022-12-22      點(diǎn)擊次數(shù):988
  病毒滅活是指用物理或化學(xué)手段殺死病毒,但是不損害它們體內(nèi)有用抗原的方法。滅活病毒,會使病容毒蛋白的結(jié)構(gòu)受到破壞,蛋白不再有生理活性,所以失去感染,致病和繁殖能力,但是常規(guī)的滅活不影響病毒蛋白的一級結(jié)構(gòu),意思就是病毒蛋白的序列沒有變化。系統(tǒng)對抗原的識別分成兩種,一種是構(gòu)像表位,一種是線性表位。構(gòu)象表位意思就是蛋白的三維結(jié)構(gòu),而線性表位就是蛋白的序列一級結(jié)構(gòu)。T細(xì)胞只需要識別線性表位就成接受呈遞細(xì)胞給出的信號,引發(fā)反應(yīng)。所以滅活的病毒具有抗原性,但失去感染力。滅活的病毒失去感染活性,但仍有融合活性,用于動物細(xì)胞工程中的細(xì)胞融合的誘導(dǎo)劑。
  
 

病毒滅活試驗(yàn)

 
 

  病毒滅活試驗(yàn)病毒懸液的制備:
  
  1、從液氮中取出凍存的試驗(yàn)用宿主細(xì)胞,在37°C溫水中迅速融化,用毛細(xì)吸管移植于含有細(xì)胞維持液的細(xì)胞管內(nèi),吹吸數(shù)次,使混勻,立即離心(3000r/min,3min),去上清液。再加入適當(dāng)?shù)募?xì)胞維持液,吹吸數(shù)次,使混勻,同上離心后,轉(zhuǎn)種于加有10培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中。逐日觀察細(xì)胞生長情況,在細(xì)胞長滿單層時(shí),用于消毒試驗(yàn)。
  
  2、取出低溫凍存的試驗(yàn)病毒毒種,37°C水浴融化,用細(xì)胞維持液作10倍稀釋,然后接種于已經(jīng)長滿單層細(xì)胞的細(xì)胞瓶內(nèi),置37°C溫箱中,使與細(xì)胞吸附、生長。逐日觀察病變,待3/4細(xì)胞出現(xiàn)病變時(shí),收獲病毒。
  
  3、將含病毒及宿主細(xì)胞的培養(yǎng)液,在冰浴條件下,用超聲波(或反復(fù)凍融)破碎宿主細(xì)胞,釋放病毒。然后,盡快離心(6000r/min,15min)去除沉淀(主要為細(xì)胞碎片),上清液即為所需的病毒懸液。按每管1.0分裝于無菌離心管(1.5)中。
  
  4、取1支病毒懸液,按病毒滴度測定法,測定其病毒滴度。其余均冷凍保存于-80°C備用。
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